🧪 Conjugation Protocol Calculator

실험 프로토콜 계산기

% solid

📊 계산 결과

Eu conjugation 양: 1.0 mg
항체 필요 부피: 0.2 ml
생산량 대비 Eu 비율: 10%

📋 프로토콜 단계 (18단계)

1
50mM MES pH 6.1 900μL + 200nm Eu-NP 100μL 넣고 sonication
2
원심분리 20분
3
상등액 버리고 DDW 630.2μL + 500mM MES pH 6.1 100μL 넣고 간단히 sonication 후, 2mg/ml NHS in DDW 221μL + 1mg/ml EDC in DDW 48.8μL 첨가
4
Shaker를 이용하여 호일로 차광한 뒤 30분 교반
5
원심분리 14,000rpm, 4℃, 20분
6
상등액 버리고 50mM MES 1mL 넣은 후 sonication
7
원심분리 20분
8
상등액 버리고 50mM MES 1mL 넣은 후 sonication
9
원심분리 20분
10
상등액 버리고 DDW 700μL + 500mM MES 100μL 넣고 sonication
11
항체 0.5mg/ml 200μL 첨가
12
Shaker를 이용하여 1시간 30분 교반
13
원심분리 14,000rpm, 4℃, 20분
14
상등액 제거하고 Blocking Buffer (1%BSA in DDW) 1mL 첨가 후 sonication
15
Shaker를 이용하여 30분 교반
16
원심분리 20분
17
상등액 제거하고 Storage Buffer (1%BSA in 50mM Tris pH 8.8) 1mL 첨가 후 sonication
18
정량 후 소분하여 냉동(-20℃) 보관

📊 계산 결과

항체 필요 부피: 0.5 ml
1M Sodium bicarbonate: 50 μL (0.050ml)
Biotin 필요량: 0.01 mg
Biotin 첨가량 (5mg/ml): 5 μL (0.005ml)

📋 프로토콜 단계

1
항체 2mg/ml 0.5mL + 1M Sodium bicarbonate (NaHCO₃) 50μL
2
Biotin (Thermo, 5mg/ml in DMSO) 5.0μL 첨가
3
4시간 roller에서 반응
4
Sephadex G-25로 정제
Roll

📊 계산 결과

100mM Na-phosphate 버퍼: 계산됨
HNa2O4P: 7.1 g
H2NaO4P: 2.1 g

📋 프로토콜 단계

1
Streptavidin 10mg을 1mM Sodium carbonate buffer pH 9.6에 녹여 10mg/ml로 제조
2
Glutaraldehyde 용액 준비
3
교반하며 반응 진행
4
정제 및 보관

📊 계산 결과

스케일 비율: 1.0배
계산된 Bead volume: 50 μL (0.050 ml)
Protocol 1 DDW: 265.1 μL (0.265 ml)
Protocol 2 MES buffer: 450 μL (0.450 ml)

📋 프로토콜 단계 (6단계)

1
Pre-washing:
• 0.5M MES, 50mM MES 50μL
• Dark-red bead 50μL
• 2mg/ml NHS 110.5μL
• 1mg/ml EDC 24.4μL (vortexing 중 첨가)
• DDW 265.1μL
• Final volume 500μL
→ Vortexing 900rpm, RT, 30min
→ Centrifuge 14000rpm, 15min, 4℃, 상층액 제거
2
Ab conjugation:
• 남은 bead volume: 50μL
• Ab 50μg (final conc. 100μg/ml)
• 50mM MES 450μL
• Final volume 500μL
→ Bead + 50mM MES 혼합 후 sonication
→ Vortexing 하면서 Ab 첨가
→ Vortexing 900rpm, RT, 1h 30min
→ Centrifuge 14000rpm, 15min, 4℃, 상층액 제거
3
Washing 1:
• 50mM Tris-Cl, 1% BSA 1.00mL
→ Sonication
→ Centrifuge 14000rpm, 15min, 4℃, 상층액 제거
4
Washing 2:
• 50mM Tris-Cl, 1% BSA 1.00mL
→ Sonication
→ Centrifuge 14000rpm, 15min, 4℃, 상층액 제거
5
Washing 3:
• 50mM Tris-Cl, 1% BSA 1.00mL
→ Sonication
→ Vortexing 900rpm, RT, 30min
→ Centrifuge 14000rpm, 15min, 4℃, 상층액 제거
6
Stock:
• 남은 bead volume 측정
• 50mM Tris-Cl, 1% BSA로 final volume 500μL까지 조정
→ Sonication
Da
-

📊 제조 계산 결과

1M Sodium bicarbonate 첨가량: 100 μL
Dye 첨가량 (1ml당 20μL): 20 μL
총 Dye 양: 0.1 mg

📈 OD 측정 및 계산

측정
280.00nm
650.00nm
OD1
OD2
AVG
2.08
9.52
-

🧮 계산 결과 (Equations 2-4)

Protein conc. (mg/ml) - Eq.2: 1.54 mg/ml
Protein conc. (M) - Eq.3: 1.03E-5 M
DOL (moles dye/mole protein) - Eq.4: 4.50
M ratio: 0.00
Conjugation ratio: 4.50

📋 프로토콜 단계 (5단계)

1
Protein 준비:
• Protein 2mg/ml 1.0ml 준비
• 1M sodium bicarbonate(pH 8.5±0.5) 100μL 첨가하여 100mM이 되게 조정
2
Dye 첨가:
• Dye 20μL 천천히 첨가 (1ml당 20μL)
• 반응이 갑자기 일어나지 않게 천천히 진행
• 항체 1mg당 dye 0.1mg 비율 (1:0.05 or 1:0.1)
3
반응:
• 전체를 호일로 차광
• 저온(창고)에서 overnight 교반
4
정제:
• Column으로 정제
• 전날 Sephadex를 미리 swelling해놓고 냉장보관
• Volume에 맞는 column으로 진행
5
정량 및 분석:
• 280nm에서 정량
• OD₂₈₀, OD₆₅₀ 측정
• Equations 2-4를 사용하여 DOL 및 conjugation ratio 계산

📊 계산 결과

필요 항체량: 120 μg
Blocking Buffer: 120 μL
NHS: 6 μL
EDC: 5 μL

📋 프로토콜 단계

1
50mM MES pH 6.0 450μL에 항체 120μg 용해
2
300nm Eu-NP 100μL 첨가
3
10 mg/mL NHS in MES 6μL + 10 mg/mL EDC in MES 5μL 첨가
4
Blocking Buffer 25μL로 반응 종료 (50mM HEPES, 1% BSA, 0.1% proclin 300, pH 8.0)
5
Storage Buffer: 50mM HEPES, 1% BSA, 0.1% proclin 300, pH 8.0

💾 배치별 저장

현재 프로토콜: Eu
SOP / 메타정보
SOP 버전
QC 자동 판정
지표: - - N/A
하한 상한
실험 리마인더
통계 대시보드
총 배치
0
QC PASS 비율
0%
최근 7일 저장
0
현재 프로토콜 평균 지표
-
Lot/Batch 이력

프로토콜 탭별로 저장됩니다. 같은 이름 저장 시 덮어쓰기 확인이 표시됩니다.